Тест на определения группы крови собак (Biopronix Rapid Vet-H Canine DEA 1) Agrolabo S.p.A. Италия (5 штук)
Тест на определения группы крови собак (Biopronix Rapid Vet-H Canine DEA 1) Agrolabo S.p.A. Италия (5 штук)
Описание и сфера применения:
Хотя в целом, верно, что у собак нет изоантител к несовместимым группам крови и они, как правило, хорошо переносят первое несовместимое переливание, практика ветеринарной медицины советует избегать этого, за исключением экстренных случаев. Период полураспада переливаемых несовместимых клеток будет достаточно коротким и, таким образом, терапевтический результат даже может быть не достигнут. Антитела, возникающие в результате переливания несовместимой крови, могут образоваться всего за 5–7 дней и способны долго существовать. Это исключает возможность использования несовместимой крови в будущей чрезвычайной ситуации. Кроме того, антитела, вырабатываемые у сук в результате сенсибилизации после переливания несовместимых групп крови, должны вызывать особую озабоченность у заводчиков. Поскольку антитела присутствуют в молозиве, самок с изоантителами к определенной группе крови не следует скрещивать с самцами этой группы
крови, особенно если их планируют использовать для вскармливания потомства. У щенков, которых они будут вскармливать, разовьется изоэритролиз, и они могут быть подвержены болезням или даже умереть из-за гемолитической анемии.
На поверхности эритроцитов собак было определено восемь специфических антигенов. На их основе применяется международно признанная система групп крови собак, «DEA» (Dog Erythrocyte Antigen). В настоящее время она характеризует восемь распространенных групп крови, с антигенами: DEA 1.1, DEA 1.2, DEA 3, DEA 4, DEA 5, DEA 6, DEA 7 и DEA 8. DEA 1.1 и 1.2 являются наиболее часто встречающимися группами крови у собак и рассматриваются как часть подгруппы DEA 1. Недавние научные исследования (основанные на иммунохроматографии и проточной цитометрии) показали, что все компоненты подгруппы DEA 1 (DEA 1.1, DEA 1.2 и, возможно, также DEA 1.3) являются не разными группами крови, а разными проявлениями одного и того же
антигена, присутствующего на поверхности эритроцитов. Одно из этих исследований, проведенное на 66 собаках, показало, что 46 пациентов (70% от общего числа) были DEA 1-положительными.
В идеале вся перелитая кровь должна быть DEA 1 отрицательной. Некоторые породы, такие как борзые, особенно подходят в качестве доноров крови из-за низкой частоты антигенов DEA 1 и DEA 7.
Однако до тех пор, пока концепция банка крови собак не будет широко принята, что сделает сертифицированную кровь доступной, метод переливания не будет широко развит. Поскольку у многих собак происходит аутоагглютинация, а очень анемичная собака может давать неоднозначные результаты, показано типирование до возникновения срочной необходимости в информации.
Определение конкретной собаки как DEA 1 положительной или отрицательной при рождении значительно упрощает принятие решений в будущем.
Собака с положительным результатом теста DEA 1 может получить как DEA 1 положительную, так и
отрицательную кровь.
Собака с отрицательным результатом теста DEA 1 может получить только DEA 1 отрицательную кровь.
Набор RapidVet-H Canine DEA 1 предназначен для определения группы крови у собак и классификации собак как DEA 1 положительных или DEA 1 отрицательных.
Принцип метода:
Тест RapidVet-H Canine DEA 1 основан на реакции агглютинации, которая происходит, когда эритроциты, содержащие антиген DEA 1 на поверхности своей мембраны, взаимодействуют с мышиным моноклональным антителом (доказано специфичным к DEA 1), лиофилизированным на тестовой карте. Моноклональные антитела восстанавливаются с помощью разбавителя и тщательно смешивается с цельной кровью пациента. Все DEA 1 положительные эритроциты вступают в реакцию с антителами, вызывая агглютинацию. Антитело совершенно не реагирует со всеми DEA 1 отрицательными эритроцитами. Результаты идентифицируются визуально.
Предупреждение: У определенного количества собак проявляется аутоагглютинация различной степени, связанная с факторами сыворотки, которые вызывают агглютинацию собственных эритроцитов пациента.
Для распознавания таких случаев, в RapidVet-H Canine DEA 1 есть тестовое поле без реагентов - “AutoAgglutination Saline Screen” (“Скрининг аутоагглютинации физиологическим раствором”).
Если у пациента проявится такая реакция, то получение результатов будет невозможно без предварительного отделения сыворотки и последовательной промывки оставшихся эритроцитов.
Красные тельца крови очищаются центрифугированием образца при 2000 об/мин в течение 5 минут.
После центрифугирования жидкая часть (плазма) отбирается и заменяется таким же объемом
физиологического раствора. Затем оператор должен ещё раз проверить образец, появится ли реакция агглютинации снова. Если да, то он должен повторить процедуру промывания еще раз.
Материалы, входящие в состав набора:
- Тестовая карточка агглютинации. Каждая карточка имеет 3 тестовых поля. Карточка включает в себя “Auto-Agglutination Saline Screen", ’’Positive Control’’ и ’’Patient Test’’. Все карточки упакованы
индивидуально в герметичные полиэтиленовые пакетики с осушителем. Хранить при комнатной температуре (от +20°C до +25°C).
- Флакон с разбавителем. Прозрачный пластиковый флакон содержит 0,02 моль/мл фосфатного буферного раствора (PBS) с рН 7,4. Наконечник-капельница дозирует по 50 мкл в одной капле. Хранить при комнатной температуре (от +20°C до +25°C).
- 1 пакет с пипетками и мешалками: для каждого теста по 1 пипетки и 3 мешалки.
1. Тестовая карточка агглютинации 5 шт.
2. Флакон с разбавителем 1 шт.
3. Упаковка с пипетками и мешалками 1 шт.
4. Инструкция по применению 1 шт.
*5 тестов/набор
Необходимые материалы, не входящие в состав набора:
Нет.
Хранение и стабильность:
1. Тестовые карточки агглютинации стабильны при комнатной температуре (от +20 до +25°C) в течение 19 месяцев с даты изготовления. Дата истечения срока годности указана на обратной стороне каждой карты.
2. Разбавитель стабилен в течение 24 месяцев с даты изготовления. Срок годности реагента указан на
этикетке флакона.
3. Примечание: на каждом тестовом наборе RapidVet-H Canine DEA 1 указана дата окончания срока годности, в которой учитывается самое раннее окончание срока годности компонента в наборе.
Даже если некоторые компоненты имеют более длительный срок годности, их использование с компонентами из других наборов не рекомендуется.
Сбор и хранение исследуемых образцов:
1. Используйте цельную собачью кровь с антикоагулянтом (ЭДТА).
2. Образцы крови должны храниться в холодильнике при температуре (+2°C-8°C). Рекомендуется провести тест не позднее, чем через 5 дней после взятия образца.
Процедура анализа:
1. Наберите минимум 0,4 мл крови пациента в шприц, содержащий ЭДТА в качестве антикоагулянта.
Для анализа требуется всего 150 мкл цельной крови.
2. Извлеките тестовую карточку из индивидуальной упаковки, напишите кличку собаки и дату проведения теста. Положите тестовую карточку на ровную поверхность.
3. Добавьте 1 каплю разбавителя (50 мкл) из флакона-капельницы в тестовое поле, обозначенное как
“Auto-Agglutination Saline Screen”.
4. Отберите небольшое количество образца крови пациента в пипетку и нанесите 1 каплю (50 мкл) в тестовое поле, обозначенное как “Auto-Agglutination Saline Screen”. Оно не содержит реагентов.
Используйте мешалку для смешивания и распределения материалов по всей поверхности тестового поля в течение примерно 10 секунд. Утилизируйте пипетку и мешалку в соответствующих контейнерах. (См. «ПРИМЕЧАНИЕ» для правильного использования пипетки).
Если в поле “Auto-Agglutination Saline Screen” агглютинация не наблюдается, продолжайте процедуру. Если наблюдается аутоагглютинация, приостановите проведение теста и, прежде чем продолжить, выполните процедуру промывки красных кровяных телец, как указано выше.
Утилизируйте пипетку и мешалки в соответствующие контейнеры.
5. Внесите по 1 капле разбавителя (50 мкл) из флакона-капельницы в каждое из 2-х оставшихся тестовых полей. Разбавитель требуется для восстановления лиофилизированных реагентов.
6. Отберите небольшое количество образца крови пациента в пипетку и нанесите 1 каплю (50 мкл) на
тестовое поле с маркировкой “Patient Test” и 1 каплю – на поле с маркировкой “Positive Control”.
Используя новую мешалку для каждого поля, распределите и перемешайте материал, слегка надавливая, в течение примерно 10 секунд.
7. Аккуратно поворачивайте карточку, чтобы позволить реагенту в тестовых полях и крови смешаться,
стараясь избегать перекрестного загрязнения между тестовыми полями.
8. Установите карточку под углом 20-30°, чтобы лишняя кровь стекла в нижнюю часть тестового поля, и считайте результаты через 1 минуту. Проверьте агглютинацию в поле “Patient Test”.
Примечание: Использование пипетки: Удерживайте пипетку между большим и указательным пальцами возле плоского, закрытого конца, надавите и не отпускайте. Удерживайте пробирку с образцом вертикально и поместите открытый конец пипетки на поверхность образца. Уменьшите давление пальцев, чтобы втянуть образец. Держите пипетку в вертикальном положении прямо над тестовым полем, в которое будет внесен образец. Легко сожмите и дайте одной капле свободно упасть в нужную зону (50 мкл). Для компенсации образца, остающегося на мешалке, каждая пипетка имеет объём чуть более 50 мкл. Используйте каждую пипетку только один раз, затем выбросьте. Ни при каких обстоятельствах не следует использовать пипетку более одного раза из-за возможности перекрестного загрязнения, что приведет к неточным результатам теста.
Интерпретация результатов:
1. Если анализ был выполнен правильно, в тестовом поле с маркировкой “Positive Control” будут видны крупные пятна агглютинации.
Примечание: Тестовое поле “Positive Control” не имеет другой цели, кроме как контролировать правильность выполнения теста. Материал, лиофилизированный в поле “Positive Control”, НЕ такой
же, как в поле “Patient Test”.
2. Если в поле с пометкой “Patient Test” агглютинация не видна, собака имеет отрицательный результат на DEA 1.
3. Если образец пациента показывает большую агглютинацию в поле с пометкой “Patient Test”, собака имеет положительный результат на DEA 1.
4. Вид агглютинации может быть разным в зависимости от интенсивности: от слабой (DEA 1 положительная +1) до сильной (DEA 1 положительная +4), как показано на рисунке ниже.
Это связано с тем, что в отличие от людей, каждая собака может иметь более одной основной группы крови: эритроциты несут антигены для каждой из этих групп. Поэтому возможно, что собаки могут
иметь меньше антигенных детерминант на поверхности эритроцитов, чем собаки, чья основная группа крови DEA 1.
Если у пациента сильная анемия, картина агглютинации может быть в виде дискретных, небольших скоплений, каждое из которых похоже на головку большой булавки, а не крупной агглютинации.
Скорость агглютинации и размер скоплений клеток у пациента с положительным результатом теста DEA 1 могут отличаться от тех, которые появляются в поле “Positive Control”.
Любую мелкозернистую грануляцию, развивающуюся спустя 1 минуту в поле “Patient Test”, следует игнорировать при определении результатов.
Ограничение теста:
1. Для получения надежных результатов важно четко следовать инструкции.
2. Всегда используйте новую дозирующую пипетку для каждого образца и новую мешалку для каждого тестового поля. Повторное использование любого устройства приведет к перекрестному загрязнению и ненадежным результатам.
3. Стабильность отдельных компонентов набора различается. Храните компоненты, как указано на этикетках. Не используйте ни один компонент после истечения срока годности. Использование просроченных материалов может привести к ненадежным результатам.
4. Разбавитель поставляется во флаконе с капельницей, чтобы свести к минимуму любое бактериальное или иное загрязнение. Разбавитель из других источников в лаборатории использовать нельзя.
5. Всегда набирайте не менее 0,4 мл крови в шприц или пробирку, содержащую ЭДТА. Меньшее количество приведет к слишком высокой концентрации ЭДТА в тестируемой пробе.









